Hoechst 33342活细胞染色液

Hoechst染料是一类在显微观察中标记DNA的荧光染料。因为这类荧光染料能标记DNA，所以它们也经常用于细胞核和线粒体的显像观察。这类染料中两个相关的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342经常使用。这两种染料都在紫外光下350nm处被激发，都在461nm处最大发射光附近发射蓝/青色荧光。Hoechst染料可以用于活细胞或者固定化细胞，并且经常用来代替其它核酸染料如DAPI。这两种染料关键的不同点在于，Hoechst 33342加有乙基，这使它具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜。在一些实验中，Hoechst 33258的渗透性明显比Hoechst 33342要弱些。这些染料也可以用来检测样品中的DNA含量，通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线。

Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

Hoechst 33342溶于水，溶解度可达20mg/mL。

染色程序：

（1）   用PBS或合适的缓冲液制备10～50μM Hoechst33342染料。

（2）   将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。

（3）   在37℃培养细胞10～20分钟。

（4）   用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

（5）   用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

注意事项：

Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

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