RIPA裂解液(IP专用)

【原理】

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。

RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。

RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种，

本产品 RIPA 裂解液的主要成分为 Tris(pH8.0),  NaCl， NP40，EDTA等。

该试剂盒含有较低盐离子浓度，更加适合免疫共沉淀等实验。

【实验所需试剂但未提供的物品】

蛋白酶体抑制剂及根据实验需要其他酶抑制剂（比如磷酸酶抑制剂）

【储存条件及有效期】

1、4℃条件下保存。

2、本试剂盒有效期一年，请在有效期内使用。

3、为了避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

【使用方法】

对于培养细胞样品：

1. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入蛋白酶体抑制剂等。

2. 样本处理

对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。

按照6孔板每孔加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。

用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。

按照6孔板每孔细胞加入100-200μL 裂解液的比例加入裂解液。

用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

如果细胞量较多，必须分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

3. 一般裂解时间建议15-20分钟可以充分裂解，而后4℃，10000-14000g离心3-5分钟，

取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够，

但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μL或200μL 。

对于组织样品：

1. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入蛋白酶体抑制等。

2. 把组织剪切成细小的碎片。

3. 按照每20毫克组织加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，

可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，

即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，

通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。

直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

【注意事项】

1. 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。

2.  裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。