MTT溶液(5mg/ml)

MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，

汉语化学名为3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄颜色的染料。

MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。

MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)

被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。

MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT

还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，

而死细胞无此功能。在特定溶剂(如DMSO)存在的情况下，

可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。

通过OD值的大小，可以判断活细胞的数量或活性，在一定细胞数范围内，

MTT结晶形成的量与活细胞的数量或活性成正比。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

操作步骤（仅供参考）：

1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞（悬浮细胞无需消化）。

2、 低速离心，收集细胞沉淀。

3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。

4、 细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000～10000 /孔。

通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。

具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。

5、 37℃5% CO₂继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6～24h。

6、 按照实验具体要求，给予0～20ul干预药物处理，37℃ 5% CO₂继续培养至合适时间。

7、 弃培养液，每孔加入MTT solution和新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育。

8、 弃培养液，每孔加入DMSO，置摇床上低速振荡，使结晶物充分溶解。

如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。

9、 在酶联免疫检测仪570 nm测定各孔吸光度。

注意事项：

1、 MTT solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

2、 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。

3、 MTT solution在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20～25 ℃水浴至全部融解后使用。

4、 观察formazan是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。

5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。

6、 应注意设立OD调零孔和对照。

7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。