吖啶橙AO/EB双荧光染色试剂盒

吖啶橙(Acridine Orange), 属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，AO嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。Ethidium Bromide嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。

吖啶橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品所含稳定剂不影响实验效果。

吖啶橙(AO)-EB双染色试剂盒使用方法：（仅供参考）
 使用前先根据用量，将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，先用现配。
  a)对于贴壁细胞或爬片，去掉培养基，用PBS洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的PBS；如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20uL工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。
  b)对于悬浮细胞，可直接加入工作液或离心收集细胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培养基或PBS中加入20uL工作液即可。室温放置2-5min后于荧光显微镜下观察。

染色结果：

吖啶橙(AO)-EB双染色试剂盒注意事项：

1. 用能通过活细胞膜与DNA结合后发蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA结合后发红色荧光的propidium iodide对细胞进行双染的方法也比较常用。

2. 如有低温离心机进行离心效果更佳。

3. 操作过程中应注意减少染色溶液暴露于强光下的时间。

4. 含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。

5. 染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到佳效果。

6. EB 和吖啶橙(Acridine Orange)有一定毒性，请小心操作。

所有产品仅限用于研发，必须由专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！

有效期： 4度密封避光12个月有效。